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引起小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定結(jié)果錯(cuò)誤的原因

發(fā)布時(shí)間:2018-04-16   點(diǎn)擊次數(shù):1596次
  引起小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定結(jié)果錯(cuò)誤的原因
  
  小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒樣品收集、處理方法:
  
  1、血清-----室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心
  
  2、血漿-----應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心
  
  3、細(xì)胞培養(yǎng)上清---檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清
  
  4、組織標(biāo)本-----切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用
  
  5、培養(yǎng)細(xì)胞-----檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
  
  小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題解析:
  
  1.加樣量不一致?
  
  解決方法:樣品稀釋前應(yīng)充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴。
  
  2.樣品數(shù)量多少不一,加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短?
  
  解決方法:重復(fù)某一樣品時(shí),加樣時(shí)間盡可能與*次接近。
  
  3.保溫時(shí)間不一致,洗滌條件不一致,操作人員不一致?
  
  解決方法:重復(fù)測(cè)定標(biāo)本,操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性。
  
  ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:①標(biāo)本因素;②試劑因素;③操作因素。