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怎么讓自己成為ELISA實(shí)驗(yàn)大神?

發(fā)布時(shí)間：2023-09-19   點(diǎn)擊次數(shù)：783次

ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少，流程短，購(gòu)買(mǎi)的即用型試劑盒也都有指導(dǎo)性很強(qiáng)的操作說(shuō)明書(shū)，單次實(shí)驗(yàn) 3-6 小時(shí)即可得到結(jié)果，實(shí)驗(yàn)小白也可以很快上手。

 試劑盒回溫




按照說(shuō)明書(shū)要求，取出試劑盒內(nèi)組分，搖勻，置于室溫（20-25℃）充分回溫。若回溫不充分，可能會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果存在較大偏差。



2  樣品及試劑準(zhǔn)備

1
樣品準(zhǔn)備


  • 按照說(shuō)明書(shū)要求選取和處理樣品，如血清樣品應(yīng)避免使用溶血或凝固不全的樣品。

  • 樣品稀釋時(shí)，應(yīng)首先保證樣品已恢復(fù)至室溫，選用一次性樣品稀釋板稀釋樣品，然后用排槍轉(zhuǎn)移至ELISA板，保證樣品孵育時(shí)間一致。禁止使用具有吸附性的細(xì)胞培養(yǎng)板。

  • 合理安排檢測(cè)量，避免ELISA板過(guò)多，造成洗板等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。


2
洗滌液配制

配置洗滌液的蒸餾水或去離子水也需提前回溫。若環(huán)境溫度較低，可置于25℃恒溫箱內(nèi)回溫。

3
濃縮酶標(biāo)抗體配制
按說(shuō)明書(shū)配置方法，現(xiàn)用現(xiàn)配。建議使用一次性離心管配制，渦旋振蕩，充分混勻


No.3  操作注意事項(xiàng)


1
加樣


  • 吸取液體時(shí)選用的移液器量程和所需量接近，添加通用試劑時(shí)可反向移液，減小誤差。

  • 樣品開(kāi)蓋時(shí)盡量遠(yuǎn)離稀釋板，防止液滴迸濺到稀釋板孔中。

  • 轉(zhuǎn)移樣品時(shí)稀釋板在上，ELISA板在下，防止交叉污染。

2
溫育


加液結(jié)束后加蓋封板膜，使用恒溫恒濕培養(yǎng)箱（注意要提前打開(kāi)培養(yǎng)箱，確保孵育時(shí)到達(dá)所需溫度），若培養(yǎng)箱不能保證恒濕條件，可自制濕盒，避免培養(yǎng)箱內(nèi)過(guò)于干燥，致使孔內(nèi)樣品蒸發(fā)。

3
洗板

洗滌時(shí)可使用自動(dòng)洗板機(jī)或多通道移液器


  • 手動(dòng)洗板時(shí)，快速翻轉(zhuǎn)ELISA板將孔內(nèi)溶液甩出，避免孔間交叉污染。

  • 每次加入洗滌液后，輕輕震蕩ELISA板后甩出洗滌液，確保洗滌充分。

  • 最后一次洗滌去除洗滌液前，確保下一步要添加的試劑可直接使用，勿使ELISA板處于干燥狀態(tài)下的時(shí)間超過(guò)一定時(shí)限。

  • 最后一次洗滌后，將ELISA板置于吸水紙上輕輕拍干。


4
底物顯色

底物溶液需避光放置，加樣時(shí)動(dòng)作迅速，板間加樣時(shí)間差距不宜過(guò)大。室溫下避光孵育。



5
終止反應(yīng)


加終止液時(shí)動(dòng)作迅速，加完后充分混勻再讀取數(shù)值。



6
讀取計(jì)算

  • 加入終止液后5分鐘內(nèi)完成讀數(shù)，避免因反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

  • 讀數(shù)前打開(kāi)酶標(biāo)儀，確保酶標(biāo)儀充分預(yù)熱通過(guò)自檢，使結(jié)果更穩(wěn)定。

  • 酶標(biāo)儀需定期校準(zhǔn)，避免讀數(shù)存在過(guò)大偏差。


No.4  其他注意事項(xiàng)




? 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

? 試劑盒嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定溫度（一般2-8℃）保存。

? 使用微量移液器時(shí)，吸取不同的液體后要注意更換槍頭，防止污染。

? 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。

? 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

? 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。和檢測(cè)裝置。



ELISA實(shí)驗(yàn)現(xiàn)在已成為實(shí)驗(yàn)室最為常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)，幾乎人人都能做，但真正做好的沒(méi)有幾個(gè)，究其原因就是步驟比較簡(jiǎn)單，一學(xué)就會(huì)，卻往往抓不往關(guān)鍵，一個(gè)小環(huán)節(jié)的錯(cuò)誤，最終會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，注意以上這些可以幫助我們高效高質(zhì)的完成ELISA試驗(yàn)。